Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患儿进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失口内自身抗纤到消失1改进型哮喘诊断腹泻的重大突破率在婴幼儿时期就有极好的叙述，多个口内自身抗纤白血病的婴幼儿中都有70%在肝细胞转成后10年末患上哮喘，而随访15年的婴幼儿这一比率缩减到84%。比起之下，占诊断1改进型哮喘一半以上的改进型1改进型哮喘的发作机制还不会获取确实的科学研究。

越来越多的人开始用于已明确系统来判别1改进型哮喘的重大突破：形态在消失多种口内自身抗纤时进入第1先决条件，消失血压异常时进入第2先决条件，消失腹泻时进入第3先决条件。一些多发口内自身抗纤白血病的形态，在1期和2期，重大突破慢，并工业发展为发作的1改进型哮喘。我们之前叙述了一第三组在首次扫描到多种口内自身抗纤试样后至少10年无哮喘的极慢重大突破者，这第三组高血压总数少，但相似性更为明确。随后，我们发现口内自身上皮细胞特异性CD8+T直通粒体底物以在重大突破平稳的高血压中都大体上不发挥作用，但在近期发作和或多或少的哮喘高血压中都很不易扫描到。这可能证明，与重大突破高血压比起，这些高血压自身致病以的闭环增强。

早期科学研究证明，尽管闭环性T直通粒体(Treg)比率正常，但哮喘高血压发挥作用一些功能缺陷，其中都包括对IL-2的底物以能力下降。此外，哮喘高血压中都的物理现象CD4+T直通粒体可能对闭环更具抵抗性，表现为物理现象T直通粒体的其会减弱，自然产生的Treg和纤外产生的其会Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T直通粒体中都IL-2底物以减弱。本科学研究的目的是叙述了CD4+闭环性T直通粒体(Treg)在一小群极平稳重大突破者中都的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群蓝本的侧向科学研究，在21岁以下胃癌的高血压亲属中都检查1改进型哮喘的危险因素。我们之前叙述了长期平稳重大突破者的相似性，他们保持稳定多重口内自身抗纤白血病超过10年，但不会消失哮喘的诊断腹泻，慢性或非受虐自身免疫。随后，10名此后保持稳定无哮喘并希望提供大量血液试样的平稳重大突破者设为T和B直通粒体功能分析方法。在目前的科学研究中都，8名慢重大突破者(SP第三组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的口内自身抗纤白血病。所有的举例来说都处于1改进型哮喘重大突破的1期，尽管一些人随后耗尽了口内自身抗纤对某些上皮细胞的白血病底物以，然而，一名高血压已经处于2期至少6年，但不会消失诊断腹泻，一名高血压被诊断为哮喘，该受试者72岁，在热带植物实验试样时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据处理中都对该供纤进行了单独效用评估。分开外周血单个核直通粒体(PBMCs)，采行多实例流式直通粒体拳法和T直通粒体其会试验效用评估供纤中都Treg的振幅、表改进型和功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类检验、表征和回归)进行无监理聚类分析方法，效用评估Treg表改进型。

结果：与身心健康供纤比起，来自慢重大突破纤的心灵CD4+T直通粒体的监理聚类证明，酪氨酸的心灵CD4+ Treg振幅缩减，与持续性其会的TNFR相关蛋白(GITR)表达单单来缩减有关。一名HbA1c上升的高血压与重大突破平稳者和匹配的相异第三组比起，Treg谱有所不同。功能分析方法证明，与身心健康供纤比起，来自平稳重大突破纤的Treg介导的CD4+物理现象T直通粒体其会显着受损。表现为对物理现象CD4+T直通粒体CD25和CD134表达单单来的其会缩减。

绘单单1 深入的表改进型分析方法证明，CD4+Treg亚改进型在慢重大突破叙述符中都缩减。由FlowSOM转化的Treg一楼，聚集在来自所有供纤的活CD4+CD45RA -直通粒体上。根据上标物表达单单来检验单单10个元簇:心灵T直通粒体_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T直通粒体;HLA-DR + GITR +心灵T直通粒体;直通程Treg_1;直通程Treg_2;直通程Treg_3;和直通程Treg_4。(a)用于9个不同Treg上标转化的10个元簇的MST。每个链表推选一个坦克部队(100个坦克部队)，很大的元坦克部队(10个元坦克部队)在链表第三组周围上色。每个链表中都的糕点绘单单回应单个上标的表达单单来级别。(b)每个元聚类的热绘单单，以证明整纤上标表达单单来。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)转化绘单单，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起轻元素为每个metacluster箱内直通绘单单(轻元素> 0.05%)明确为HD和SP第三组:直通程Treg_2 (e),直通程Treg_3 (f),直通程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T直通粒体(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T直通粒体(l)。蓝色左上角推选**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩检验。此键适用于绘单单形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘单单2 用于CITRUS的预测模改进型证实，Treg振幅的缩减是重大突破平稳的字样。标准去极化(a - f)和水果分析方法(g-k)比较SP举例来说和匹配的HD举例来说在CD4+CD45RA−T直通粒体上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的推选性绘单单。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富含，然后通过HLA-DR和GITR表达单单来进行分开，精心设计FlowSOM群纤。(b) HD(黑点)和SP(斑点)第三组以及供纤SP 606(蓝色)中都CD25+ cd127的振幅概述绘单单。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去极化闭包的箱内直通绘单单;(c) HLA-DRloGITR−(直通程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(直通程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(直通程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+直通程T cell)。(g - i)柑桔簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达单单来风力纹理，标记凸显的簇被识别为SP和HD叙述符相互间的不同。(j)箱内直通绘单单证明了在SP(斑点)和HD(灰点)第三组中都，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的比起轻元素(比率)。(k)直方绘单单证明每个簇的表改进型(粉红色)和Treg上标比起表达单单来与背景表达单单来(浅蓝色);上列，直通程Treg_3;比如说一行，直通程Treg_4。背景与所有其他簇中都上标的表达单单来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩检验

绘单单3 与身心健康献血者比起，重大突破平稳者心灵treg的GITR缩减。每个心灵CD4+T直通粒体元簇(心灵T直通粒体_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T直通粒体;HLA-DR + GITR +心灵T直通粒体;直通程Treg_2;直通程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个表达单单来上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)叙述符的表达单单来热绘单单(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中都所有HD(黄褐色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR表达单单来串接，证明直方绘单单(c)和概述绘单单(d)。Wilcoxon以此类推符号秩和检验，p< 0.07(蓝色)所有供纤包括，p< 0.05(浅蓝色)供纤SP 606和匹配的HD不包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR表达单单来，从标准去极化，从所有HD(黄褐色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(蓝色)串接，证明直方绘单单(e)和概述绘单单(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推符号秩检验

绘单单4 来自平稳重大突破的CD4+ treg直通粒体控制物理现象CD4+T直通粒体的能力下降。SP第三组用浅蓝色的直通和左上角回应，HD第三组用蓝色的直通和左上角回应，蓝色的直通/左上角回应供纤sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T直通粒体进行分选。CD4+CD25−(应以答者)被上标为CFSE, Treg按观察的比率校准。用抗CD3 /28微珠酪氨酸直通粒体，人才培养3同月进行流式直通粒体拳法扫描。(a-d)与CD4+应以答者比起应以的treg人才培养(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应以答者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE其会百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的其会百分比。用于白血病相异(酪氨酸的响应以直通粒体内含treg)计算其会百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘单单5 物理现象CD4+T直通粒体对平稳重大突破的T直通粒体酪氨酸的其会更引人注意。SP第三组用浅蓝色的直通和左上角回应，HD第三组用蓝色的直通和左上角回应，蓝色的直通/左上角回应供纤sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T直通粒体进行分选。CD4+CD25−(应以答者)被cfsel上标，treg按观察的比率校准。用抗CD3 /28微珠酪氨酸直通粒体，人才培养3同月进行流式直通粒体拳法(CD25反染)和直通粒体因兄分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606应以答者共同人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE其会%-(b)。(c,d) CD25其会%-(c)和CD134其会%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中都的表达单单来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们计算单单来的结论是，来自平稳重大突破兄的酪氨酸心灵CD4+Treg在GITR表达单单来中都获取了扩展和丰富，突显了进一步科学研究Treg在1改进型哮喘效用形态中都的异质性的不足之处。

原文单单处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28